6.7. Применение в ветеринарии

Р. Р. Ахмеров. Регенеративная медицина на основе применения плазмы аутологичной крови. Технология Plasmolifting. 2-е изд., 2020. С. 159–172. Публикуется с разрешения автора.

Аутологичная плазма применяется для лечения болезней животных с 2012 г. Ниже представлены результаты, полученные главным специалистом по применению метода «Плазмолифтинг» в ветеринарии Вероникой Гусевой и соавторами.

Ренат Ахмеров

Цитологическое исследование раневой поверхности при использовании аутологичной плазмы с повышенным содержанием тромбоцитов для лечения ран у кроликов

(Настоящий материал был опубликован в сборнике материалов Международной научно-практической конференции «Перспективы устойчивого развития АПК». Омск, 2017)

В.А. Гусева, Т.Ш. Кузнецова, Е.В. Рыбин, Б.С. Семенов

Введение

АППТ является универсальным препаратом, предположительно обладающим недооцененным регенеративным и противовоспалительным действиями [1]. Для исследования вопроса эффективности применения АППТ проводится достаточно много исследований: визуальное наблюдение, термографические, гистологические исследования. В данном случае предпринята попытка исследовать регенеративные свойства АППТ, полученной методом «Плазмолифтинг-Анимал», при лечении ран кроликов через цитологические исследования. Характер и способ получения материала для цитологического исследования определяются локализацией патологического процесса в органе (ткани). При заболеваниях кожи с помощью цитологического исследования изучают соскобы и отпечатки с изъязвленной поверхности, а также пунктаты из патологических образований.

Цитологическое исследование в хирургии применяется с целью исследования динамики раневого экссудата. При этом устанавливают характер раневого процесса, наблюдают эффективность обработки раны и динамику ее заживления, оценивают иммунные свойства организма и его местные регенераторные возможности. При трофических язвах появление в препаратах-отпечатках лимфоцитов и моноцитов свидетельствует об эффективности проводимого лечения и хорошем прогнозе. Наличие в экссудате большого числа плазматических клеток указывает на затяжное течение процесса. Разработаны критерии для интерпретации цитологических данных при посттравматических и осложненных послеоперационных ранах, актиномикотических свищах, сифилитических язвах [7]. С целью определения эффективности выбранного способа лечения и суждения об иммунологических силах организма и регенеративных процессах в ране проводится цитологическое исследование мазков-отпечатков с раневой поверхности. Изготовление и анализ отпечатков раневой поверхности — технически простой, выполнимый в любых условиях и достаточно объективный метод изучения раневого процесса. Систематическое исследование отпечатков раскрывает динамику морфологических изменений раневого экссудата и поверхностного слоя грануляционной ткани; они отражают реактивные, иммунобиологические силы организма и регенеративно-воспалительные процессы, протекающие в ране. Метод отпечатков позволяет судить о напряженности борьбы организма с инфекцией и о динамике очищения ран от микробов и некротических тканей [8, 9]. Цитологический анализ отпечатков помогает установить фазу раневого процесса и может быть использован для оценки хирургического вмешательства, успешности медикаментозного лечения, а также уточнения показаний и противопоказаний к хирургическому вмешательству в дальнейшем. Однако цитологический анализ отпечатков — только дополнительный метод изучения раневого процесса и должен проводиться в комплексе с другими методами исследования пораженных животных [10].

Цитологическое исследование — оценка характеристик морфологической структуры клеточных элементов в цитологическом материале. Оно является одним из надежных методов диагностики, хоть и обладает меньшей достоверностью по сравнению с гистологическими методами исследования.

Цитологическое исследование демонстрирует различия в мазках отпечатков таких элементов, как эритроциты и лейкоциты, при применении тромбоцитарной аутоплазмы в сравнении с традиционными методами лечения ран. Только комплексные исследования позволяют создать доказательную базу эффективности препарата, и цитологические исследования занимают важное место в этом комплексе [2].

Цель и задачи

Целью исследования явилось изучение влияния тромбоцитарной аутоплазмы, полученной методом Plasmolifting, на процессы заживления ран у кроликов посредством цитологического исследования. Для достижения цели исследования необходимо решить следующие задачи:
●оценить воздействие тромбоцитарной аутоплазмы, полученной методом Plasmolifting, на заживление экспериментальных ран у кроликов;
●провести цитологическое исследование биоптатов кожи и раневой поверхности при лечении ран тромбоцитарной аутоплазмой;
●определить клиническую эффективность применения тромбоцитарной аутологичной плазмы, полученной методом Plasmolifting, при лечении ран у кроликов.

Материалы и методы исследований

Кроликам наносили раны площадью 5 см2 на дорсальной стороне туловища, предварительно подготовив операционное поле, соблюдая все правила асептики и антисептики. Для получения тромбоцитарной аутоплазмы брали кровь в объеме 9 мл, центрифугировали на центрифуге 80-2s со скоростью 3500 об./мин 5 мин. Получали тромбоцитарную аутоплазму в объеме 3 мл и вводили под дно раневой поверхности. Раневую поверхность подопытной группы кроликов не обрабатывали антисептиками, а только вводили тромбоцитарную аутоплазму в объеме 3 мл под дно раневой поверхности 1 раз в 5 сут, всего было проведено четыре процедуры. Раневую поверхность контрольной группы ежедневно обрабатывали мазью Левомеколь, в состав которой входят следующие компоненты: левомицетин — 0,75 г, метилурацил — 4 г, полиэтиленоксид-400 — 76,2 г, полиэтиленоксид-1500 ― 19,05 г. Левомеколь оказывает противовоспалительное (дегидратирующее) и антимикробное действие. Левомицетин (хлорамфеникол) активен в отношении грамположительных бактерий: Staphylococcus spp., Streptococcus spp.; грамотрицательных бактерий: Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitidis, Escherichia coli, Haemophilus influenzae, Salmonella spp., Shigella spp., Klebsiella spp., Serratia spp., Yersinia spp., Proteus spp., Rickettsia spp.; активен также в отношении Spirochaetaceae и некоторых крупных вирусов. Препарат способен проникать внутрь тканей без повреждения биологических мембран [4]. Левомеколь обладает выраженным обезболивающим эффектом и ярко выраженным лечебным потенциалом. Использовать мазь можно уже в первой фазе раневого процесса [5]. Мазки-отпечатки в нашем случае брали до лечения и через сутки после четвертой инъекции (последней) и окрашивали гематоксилин-эозином. Метод отпечатков с раневой поверхности заключается в том, что отпечатки изготовляются непосредственно с поверхности раны, и наряду с клетками раневого экссудата в них находят клетки вновь образующейся грануляционной ткани. Отпечатки получают при помощи предметного стекла. Перед изготовлением отпечатка осторожно удаляют с поверхности раны стерильным марлевым тампоном, увлажненным изотоническим раствором натрия хлорида, раневой экссудат (сухой тампон даже при легком прикосновении нередко травмирует грануляционную ткань, особенно в первые дни после ее образования). Затем перпендикулярным прикосновением к поверхности раны стерильным и обезжиренным в спирт-эфире стеклом получают на последнем отпечаток. Не допускаются сильное надавливание стеклом на раневую поверхность и скользящие движения, так как в противном случае клетки деформируются. С одного участка раны последовательно берут четыре-пять отпечатков. В первом участке преобладают клетки раневого экссудата и гнойный детрит. В последующие отпечатки, особенно в последние два, попадают клетки и микробы, находящиеся на раневой поверхности, в том числе клетки пролиферата (поверхностного слоя грануляционной ткани), имеющие наибольшее диагностическое значение. Отпечатки следует брать с возможно большей поверхности или с нескольких участков раны, так как регенеративные процессы и распределение клеток по раневой поверхности неравномерны. Возможно получение отпечатков при помощи ватного шарика. Перед взятием отпечатка удаляют с поверхности раневого канала кровь, гной, иной экссудат. Для получения раневого отпечатка пинцетом извлекают стерильный ватный шарик из пробирки с изотоническим раствором натрия хлорида и вводят в раневой канал до соприкосновения с биологической тканью. Затем тампон одномоментно прикладывают к предметному стеклу. Полученные отпечатки необходимо быстро подсушить на воздухе и зафиксировать в этиловом или метиловом алкоголе в течение 5 мин или спирт-эфире (в равных частях) 15 мин. Фиксированные отпечатки, пиофлорограммы, как и мазки крови, окрашивают по Романовскому–Гимзе (азур-эозин разбавляют дистиллированной водой 1:10, мазок помещают в чашку Петри на стеклянные палочки отпечатком вниз и наливают краситель). Отпечатки с поверхности свежих ран следует красить 45–60 мин, а с поверхности гранулирующих ран — 1,0–1,5 ч. После окраски мазок промывают дистиллированной водой [11]. После фиксации отпечатка на обратной стороне стекла отмечают восковым карандашом дату и номер истории болезни. Изготовленные таким образом отпечатки изучают под микроскопом [3, 6].

Результаты исследований

В нашем случае в мазках-отпечатках, полученных сразу после получения ран, эритроциты покрывали все поле зрения (рис. 6.80). В опытной группе кроликов эритроциты также покрывали все поле зрения, и встречались единичные лейкоциты, то время как в мазках контрольной группы лейкоциты покрывали все поле зрения (рис. 6.81).

Рис. 6.80. Значительное количество эритроцитов, окрашено гематоксилином и эозином, увеличение ×400

Рис. 6.81. а — опыт, эритроциты покрывают все поле зрение, незначительное количество лейкоцитов; б — контроль, лейкоциты покрывают все поле зрения, окрашено гематоксилином и эозином, увеличение ×400 а б Данные цитологического исследования дополняют и создают полную картину воздействия аутологичной плазмы на раневую поверхность. При визуальном осмотре при применении тромбоцитарной аутоплазмы регенерация пораженных тканей шла быстрее по сравнению с контрольной группой. Гистологическое исследование также подтвердило стимулирующее регенерацию действие. Кроме того, термография (исследование температуры раневой поверхности) продемонстрировала снижение поверхностной температуры ран при обработке аутологичной плазмой по сравнению с контрольной группой. При цитологическом исследовании мы установили, что аутологичная плазма способствует уменьшению концентрации лейкоцитов в ране, и таким образом подтвердили противовоспалительное действие данного препарата. Выводы и предложения Клеточный состав мазков-отпечатков раневой поверхности кроликов сразу после нанесения ран соответствует клеточному составу раневой поверхности мазков-отпечатков после четвертой инъекции тромбоцитарной аутологичной плазмы. Тромбоцитарная аутологичная плазма оказывает противовоспалительное действие, что подтверждают проведенные исследования: в мазках контрольной группы животных лейкоциты покрывают все поле зрения, в то время как в отпечатках подопытной группы встречаются лишь единичные лейкоциты на фоне многочисленных эритроцитов. Таким образом, цитологические исследования подтверждают предположение о выраженных регенеративных свойствах тромбоцитарной аутоплазмы, в силу чего препарат может быть рекомендован к использованию в лечении ран.

Справочная литература

1. Ахмеров Р.Р. Регенеративная медицина на основе аутологичной плазмы. Технология Plasmolifting™. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2014. 140 с.

2. Гусева В.А., Короткова О.И. Морфологическое сравнение биоптатов раневой поверхности кожи после применения метода «Плазмолифтинг» и общепринятых методов лечения ран у кроликов // Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии: материалы 3-го международного конгресса ветеринарных фармакологов и токсикологов. СПб., 2014. С. 76–77.

3. Зайцев С.Ю. Биохимия животных. Фундаментальные и клинические аспекты: учебник для вузов. СПб.: Лань, 2015. С. 384.

4. Кузин М.И., Костюченок Б.М. Раны и раневая инфекция: руководство для врачей. 2-е изд., перераб. и доп. М.: Медицина, 1990. 592 с.

5. Ляпунов Н.А., Даценко Б.М., Мохерт Н.А. и др. Теория и практика местного лечения гнойных ран (Проблемы лекарственной терапии). Киев, 1995. 190 с.

6. Мастыко Г.С. Развитие раневого воспаления у животных и схема лечения // Ветеринария. 1975. № 8. С. 79–81.

7. Петрова А.С., Алипов В.И. Цитологическое исследование // Большая медицинская энциклопедия. Т. 27. М., 1986. 576 с.: ил.

8. Семенов Б.С., Стекольников А.А., Суховольский О.К., Тимофеев С.В. Практикум по общей хирургии. СПб.: Лань, 2013. 368 с.

9. Шакуров М.Ш. Лечение ран у животных. Ветеринарные и зооинженерные проблемы животноводства // Материалы 1-й Международной научно-практической конференции 28–29 ноября 1996 г. Витебск, 1996. С. 79.

10. Цитология в ветеринарии [Сайт]. URL: http://meduniver.com/Medical/Biology/421.html

11. Цитология заживления ран. Метод раневых отпечатков [Сайт]. URL: http://medical-planet.su/xirurgia/1253.html

Инновационные технологии для купирования язвенных процессов при бурситах у высокопродуктивных коров

(Настоящий материал был опубликован в сборнике материалов Международной научно-практической конференции «Перспективы и актуальные проблемы развития высокопродуктивного молочного и мясного скотоводства». Витебск: ВГАВМ, 2017.)

А.А. Стекольников, Б.С. Семенов, В.А. Гусева, Т.Ш. Кузнецова

Введение

Молочное животноводство может успешно развиваться при высокой продуктивности животных. Интенсивный обмен веществ у этих животных приводит к тому, что даже незначительные нарушения условий кормления и содержания приводят к существенным нарушениям обмена веществ и значительному снижению резистентности организма, что способствует возникновению болезней заразной и незаразной этиологии, в том числе хирургических [2, 3, 8]. Для получения высокой продуктивности от животного большое значение имеет физиологическое состояние различных систем его организма. Не является исключением для высокопродуктивных коров и состояние конечностей. Наряду с болезнями вымени и половых органов, которые также способствуют снижению молочной продуктивности и преждевременной выбраковке, хирургические болезни конечностей у крупного рогатого скота также имеют широкое распространение. У коров, страдающих болезнями конечностей, молочная продуктивность снижается на 10–14%, а воспроизводительная способность — на 12–16%. Для нормального функционирования конечностей большое значение имеет состояние копытец и отсутствие на конечностях хирургической патологии. А это возможно при правильном уходе за копытами и при наличии определенной двигательной нагрузки [7]. Преждевременная выбраковка высокопродуктивных коров из-за болезней пальцев вынужденно повышает ротацию стада, нарушает планы племенной работы, не позволяет полностью реализовывать генетический потенциал породы и снижает доходность отрасли. Лечение хирургических болезней у животных, в том числе ран и язв, является актуальным вопросом ветеринарной медицины [9, 10, 12]. У крупного рогатого скота также часто встречаются повреждения кожного покрова. Обработка ран мазями у этого вида животных — не лучший выбор для лечения, так как мази быстро удаляются с поверхности ран сразу после их нанесения, что объясняется условиями содержания данного вида животных. Требуется разработка препаратов, которые долгое время могли бы фиксироваться на пораженной поверхности. Гель Этоний адсорбирует экссудат, стимулирует и ускоряет регенерацию, но на поверхности раны долго не удерживается [5]. Ихтиоловая мазь широко применяется при лечении ран у крупного рогатого скота. Ее применяют ежедневно либо раз в несколько дней, например, раз в три дня под повязку [4]. Также на основе ихтиоловой мази готовят другие препараты для лечения крупного рогатого скота [6]. Представляет интерес поиск новых методов лечения, отвечающих современным требованиям. Разработка безопасных, экологически чистых препаратов для лечения животных с ранами и язвами является актуальной задачей современной ветеринарной науки. Применение АППТ с лечебной целью отвечает этим требованиям и получает распространение как в гуманной, так и в ветеринарной медицине [1, 10, 11]. При введении аутологичной плазмы происходит высвобождение факторов роста, гормонов и других биологически активных молекул, что приводит к активации процессов репарации поврежденных тканей. Причем комплексное применение плазмы более эффективно по сравнению с монотерапией. Цель исследования заключалась в оценке эффективности применения АППТ в комплексной терапии для лечения язв в области тарсального сустава и для купирования язвенного процесса на коже в области бурсы при бурсите подкожной латеральной слизистой сумки в области тарсального сустава.

Материалы и методы исследований

Объектом исследований служили 800 дойных коров голштино-фризской породы с продуктивностью около 8000 л. При этом была проведена хирургическая диспансеризация. Для опытов подбирали коров с язвами в области тарсального сустава таким образом, чтобы язвы были приблизительно одинаковыми по площади и локализации. Коровам подопытной группы (пять животных) АППТ вводили в одну точку под дно язвы тарсального сустава. Всего было сделано пять инъекций раз в 7 сут. Дополнительно язвы ежедневно обрабатывали ихтиоловой мазью. Коровам контрольной группы (пять животных) язвы обрабатывали ежедневно ихтиоловой мазью. АППТ у всех видов животных подопытной и контрольной групп получали по методу Plasmolifting. Кровь у животных брали в объеме 8 мл в специальные пробирки Plasmolifting с разделительным гелем, центрифугировали на центрифуге СМ-6 (Латвия) со скоростью 2500 об./мин. После центрифугирования эритроциты и лейкоциты оставались под гелем, а АППТ — над гелем. Затем АППТ сразу после центрифугирования извлекали из пробирки в шприц и вводили в область повреждения.

Результаты и обсуждение

При проведении хирургической диспансеризации выяснили, что хирургические болезни имели широкое распространение и составили 80% общей заболеваемости. При этом болезни конечностей занимают 75% общего числа хирургических болезней. Бурситы диагностировали у 25% животных из общего числа страдающих хирургическими болезнями. Наиболее часто выявляли бурситы тарсального сустава — 24% общего числа болезней конечностей, как одной, так и обеих конечностей одновременно, зачастую разной степени выраженности. Причина данной патологии чаще связана с повреждением латеральной бурсы в области тарсального сустава. Острое течение бурсита наблюдали в 12% случаев, остальной процент бурситов (88%) приходился на хронический, вызываемый пролонгированным действием травмирующего фактора низкой интенсивности. К развитию бурситов предрасполагают: потеря упитанности, снижение общей резистентности организма и устойчивости тканей к механическим повреждениям и инфекции, связанные зачастую с погрешностями в кормлении и содержании животных. Согласно полученным данным, достоверных отличий (p ≤0,05) между показателями сыворотки крови подопытной и контрольной групп животных не выявлено. Установили, что хирургические болезни протекали на фоне гиперпротеинемии, в частности гиперглобулинемии, что косвенно указывает на нарушения функции иммунной системы. Также было выявлено повышенное содержание в сыворотке крови мочевины, холестерина и фосфора. Анализируя вышеуказанные данные, установили, что хирургические болезни у высокопродуктивных коров с выраженной молочной доминантой составляют 80% общей заболеваемости животных. При этом наиболее частой болезнью являются бурситы, в большинстве своем — бурсит в области тарсального сустава. Язвы на латеральной поверхности тарсального сустава у коров диагностируются как на коже, так и при бурсите подкожной латеральной сумки на ее поверхности. Исследования провели на коровах с язвами, которые диагностированы на латеральной поверхности тарсального сустава при бурситах. Бурситы имели хроническое течение, сопровождались разростом соединительной ткани, имели плотную консистенцию, не флюктуировали. Размер припухлости был 8×12 см. Припухлость выступала над плоскостью сустава на 2–3 см, в центре нее располагалась язва. До лечения у обеих групп крупного рогатого скота язвы в области тарсального сустава выглядели одинаково, площадь язвенной поверхности составляла 5 см2. Язвенные поверхности были полностью покрыты струпом от бордового до коричневого цвета. После первой инъекции АППТ у коров подопытной группы струп плотно прилегал к язвенной поверхности, c трудом поддавался принудительному отсоединению, был бурого цвета. Язва располагалась на поверхности пораженной латеральной бурсы тарсального сустава. Отека вокруг язвенной поверхности и болезненности не отмечали. При принудительном отслоении струпа была видна грануляционная ткань. У коров контрольной группы наблюдали схожую картину, при этом у трех коров из пяти отмечалось повышение местной температуры вокруг раневой поверхности по сравнению с окружающими тканями при пальпаторном исследовании. После второй инъекции АППТ у коров подопытной группы струп был бурого цвета, плотно прилегал к язвенной поверхности, тяжело поддавался отсоединению. Струп плотный, сухой. У одной коровы из пяти наблюдали разрыв струпа посередине. В разрыве визуализировалась грануляционная ткань. При принудительном отсоединении струпа видна грануляционная ткань. Стадия эпителизации отсутствует. В контрольной группе коров визуально состояние язвенной поверхности оставалось без изменений. После третьей инъекции АППТ у двух коров подопытной группы из пяти струп легче поддавался принудительному отсоединению и был более увлажнен. Цвет струпа бурый. При отсоединении струпа было отмечено наличие грануляционной ткани и начало стадии краевой эпителизации. У коровы с разрывом струпа посередине произошло отслоение струпа полностью. Раневая поверхность покрыта грануляционной тканью, и также было видно появление стадии краевой эпителизации. У всех пяти коров не отмечалось повышение местной температуры. Болезненность и отек не наблюдались. У животных контрольной группы при принудительном отсоединении струпа видна грануляционная ткань. Наличие стадии эпителизации не отмечалось. У двух животных из пяти определяли повышение местной температуры вокруг язвенной поверхности. После четвертой инъекции АППТ у коров подопытной группы струп легко отсоединялся. Струп был бурого цвета, увлажнен. В центре прикрепления струпа сформировалась грануляционная ткань, эпителизация покрывала 50% раневой поверхности. У коровы с отслоившимся струпом стадия эпителизации практически завершилась. Отек и болезненность отсутствовали. Повышение температуры окружающих тканей не определялось. В контрольной группе коров по-прежнему язвенная поверхность оставалась практически без изменений: струп был плотным, сухим, сложно поддавался принудительному отсоединению. Под струпом мы наблюдали рост грануляционной ткани, эпителизации не было заметно. Повышения местной температуры, отека и болезненности не отмечали. После пятой инъекции АППТ в подопытной группе у трех коров из пяти стадия эпителизации завершилась полностью. У двух из пяти сохранялось наличие струпа с грануляционными тканями под ним. Стадия краевой эпителизации занимала 60% от раневой поверхности. Болезненность и отек отсутствовали. Струп был бурого цвета, увлажненный и легко отслаивался. У коров контрольной группы струп был плотным, сухим, бурого цвета, по краям легко отделялся от окружающих тканей. Стадия краевой эпителизации была незначительной, и под струпом была видна грануляционная ткань. Болезненность и отек отсутствовали. При пальпации окружающих тканей температура не была повышена. У одной коровы из пяти было полное отсоединение струпа, на раневой поверхности была сформирована грануляционная ткань, однако отсутствовала стадия краевой эпителизации. В связи с вышеизложенным можно сделать вывод, что комплексное применение АППТ при лечении язв тарсального сустава у крупного рогатого скота ускоряет процессы эпителизации. Процессы заживления язвенной поверхности тарсального сустава контролировали посредством термометрии. Термометрическое исследование у коров показало, что после второй инъекции АППТ температура язвенной поверхности начала снижаться в подопытной группе животных и после пятой инъекции была достоверно (p ≤0,05) ниже на 31,72% по сравнению с контрольной группой и практически равнялась температуре на здоровой поверхности кожи. Температура тела, пульс и дыхание оставались в норме у всех подопытных животных. Введение АППТ не влияло на исследуемые показатели крови у животных, а именно гематологические показатели подопытных животных свидетельствовали об отсутствии угнетения звеньев эритро-, лейкои тромбопоэза. Биохимический скрининг не выявил патологических отклонений со стороны функции печени и почек. Это согласуется с литературными данными об отсутствии побочных эффектов от применения тромбоцитарной аутоплазмы в гуманной медицине для восстановления дефектов различных тканей. Метод «Плазмолифтинг» позволяет получать аутологичную плазму, в которой тромбоциты содержатся в физиологических количествах. Аутологичная плазма, полученная по указанной технологии, является естественным и безопасным стимулятором регенерации, воздействующим на все стадии регенерации.

Выводы

Несмотря на наличие многочисленных методов лечения ран и язв у животных, продолжается поиск более эффективных, экологически безопасных, экономически выгодных способов, стимулирующих восстановительные процессы в организме животного. Важным моментом в лечении продуктивных животных является использование препаратов с минимальным количеством побочных эффектов, так как полученные продукты от животных поступают в реализацию. Продолжительные курсы антибиотикотерапии и противовоспалительной терапии также негативно влияют на качество продукции. Следовательно, поиск средств, позволяющих снизить или заменить курсы антибиотикотерапии и противовоспалительной терапии, остается актуальным в продуктивном животноводстве. Использование аутологичной плазмы в комбинации с ихтиоловой мазью при лечении язв в области тарсального сустава у коров приводило к полному закрытию язвенной поверхности на 34–36-е сутки, в то время как при использовании только ихтиоловой мази процессы заживления практически не изменялись в сравнении с исходным состоянием.

Справочная литература

1. Ахмеров Р.Р. Регенеративная медицина на основе аутологичной плазмы. Технология Plasmolifting™ / Р.Р. Ахмеров. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2014. 140 с.

2. Ветеринарные мероприятия на молочных комплексах: пособие (производственнопрактическое издание) / Э.И. Веремей, В.А. Журба, В М. Руколь. Минск: Белорусское сельское хозяйство, 2010. 28 с.

3. Веремей Э.И. Влияние экзогенных факторов на состояние здоровья и продуктивность коров молочных комплексов / Э.И. Веремей, В.М. Руколь, А.П. Волков, А.А. Стекольников, Б.С. Семенов // Актуальные проблемы ветеринарной хирургии: материалы Международной научной конференции 6–7 октября 2011 г. Ульяновск, 2011. С. 20–30.

4. Волотко И.И. Профилактика и лечение болезней дистального отдела конечностей коров / И.И. Волотко, А.Н. Безин, Н.И. Бутакова // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2014. №

5. С. 96–98. 5. Журба В.А. Лечение крупного рогатого скота с дерматитами гель-этонием 1% // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. 2014. № 5. С. 127– 130.

6. Лопатникова С.А. Эффективность 0,2% раствора акарина и 0,002% абамектина на основе ихтиоловой мази при хориоптозе крупного рогатого скота // Рос. паразитол. Журн. 2012. № 2. С. 91–94.

7. Характеристика ортопедических патологий у крупного рогатого скота / Е.М. Марьин, В.А. Ермолаев, О.Н. Марьина, И.С. Раксина // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. 2012. № 4. С. 66–69.

8. Семенов Б.С., Суховольский О.К . Заболевание конечностей у дойных коров // Международный симпозиум Аграрного Университета. Кишинев, 2009. С. 201–202.

9. Чеходариди Ф.Н., Персаева Н.С., Гугкаева М.С. Этиопатогенетическая терапия гнойно-некротических язв копытец у коров // Иппология и ветеринария, 2016. Т. 1, № 19. С. 116–120.

10. Foster T.E. Platelet-rich plasma: from basic science to clinical applications / T.E. Foster, B.L. Puskas, B.R. Mandelbaum, M.B. Gerhardt, S.A. Rodeo // Am. J. Sports Med. 2009. Vol. 37, №

11. P. 2259–2272. 11. Overton T.R., Yasui T. Practical applications of trace minerals for dairy cattle //Journal of Animal Science. 2014. Vol. 92, No. 2. P. 416–426.

12. Schulz T., Gundelach Y.1, Feldmann M., Hoedemaker M. Early detection and treatment of lame cows. Effect on duration and prevalence of lesion-specific lameness // Tierarztl. Prax. Ausg. G. Grosstiere Nutztiere. 2016. Vol. 44, No. 1. P. 5–11.

Влияние аутологичной плазмы на местный иммунитет при лечении ран у лошадей в эксперименте

(Настоящий материал опубликован в VetPharma, № 2, март-апрель 2017 г.)

В.А. Гусева, Б.С. Семенов, Т.Ш. Кузнецова

Введение

Применение аутологичной плазмы в медицинской практике основывается на том, что за счет высвобождения многочисленных различных факторов роста и других биологически активных молекул наблюдаются активация процессов регенерации и восстановление поврежденных участков тканей. В гуманной медицине аутоплазму используют в косметологии, стоматологии, гинекологии, при лечении остеоартрозов [1, 4]. В ветеринарной практике применяли АППТ с получением положительных результатов. При длительно не заживающих ранах конечностей у лошадей после лечения аутоплазмой в биопсийных препаратах были выявлены в большем количестве плотные пучки коллагена, ориентированные параллельно друг другу и вышележащему эпителию, в то время как в контрольных образцах тканей определяли меньшее количество коллагеновых волокон, ориентированных случайным образом [7]. Было определено, что применение аутологичной плазмы способствует формированию сухожилия с нормальной морфологией и функциональностью без каких-либо серьезных побочных реакций [6]. К противопоказаниям применения собственной плазмы пациента можно отнести злокачественные новообразования, системные заболевания крови, аллергическую реакцию на коагулянт [1]. Следовательно, при показаниях аутоплазма может быть рекомендована к применению как стимулирующий регенерацию и противовоспалительный препарат. При нарушении барьерно-защитных функций кожного покрова с целью предотвращения проникновения патогенов запускаются многоступенчатые восстановительно-регенеративные процессы, тесно связанные с функционированием клеток иммунной системы. Иммунологическая функция кожи в основном реализуется за счет различных популяций лимфоцитов (90% из них приходится на Т-лимфоциты, 10% — на В-лимфоциты). Лимфоциты способны к миграции из кровеносного русла или лимфатического сосуда в кожу, а также обладают аффинитетом к дерме, часть из них задерживается в ней, чтобы участвовать в иммунных реакциях [2, 3, 5]. В связи с вышесказанным представляет интерес определение содержания иммунокомпетентных клеток кожи при использовании аутологичной плазмы в сравнении с общепринятым методом лечения.

Материалы и методы

Использовали две группы лошадей (контрольную и подопытную), в каждой группе было по 10 животных, кобылы и мерины в возрасте 5–10 лет, беспородные. Раны наносили в средней трети шеи, площадью 5 см2, предварительно подготовив операционное поле. Аутологичную плазму получали по технологии Plasmolifting — Animal. Подопытной группе животных ежедневно наносили мазь Левомеколь и вводили тромбоцитарную аутоплазму в объеме 3 мл под дно раневой поверхности 1 раз в 3 сут, всего было сделано четыре процедуры. Раневую поверхность контрольной группы лошадей ежедневно обрабатывали только мазью Левомеколь. Биоптаты раневой поверхности от животных обеих групп отбирали на 11-е сутки лечения и проводили иммуногистохимическое исследование для выявления Т-лимфоцитов (CD3+-клетки) и B-лимфоцитов (СD20+-клетки). Также оценивали биоптаты здоровой кожи средней трети шеи животного. С целью определения В-лимфоцитов используют метод розеткообразования с эритроцитами, которые обработаны антителами и комплементом EAC- РОК (с эритроцитами мыши). Для выявления Т-лимфоцитов используют метод спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана.

Результаты и обсуждение

В подопытной группе лошадей при использовании тромбоцитарной аутоплазмы в комплексе с мазью Левомеколь в биоптатах раневой поверхности при иммуногистохимическом окрашивании CD20+-клетки не обнаруживаются, заметны единичные CD3+-клетки в дерме, около 8–10 CD3+-клеток в поле зрения в базальном слое эпидермиса. Такую же картину наблюдали при иммуногистохимическом окрашивании биоптатов здоровой кожи. В контрольной группе лошадей при использовании только мази Левомеколь в результате иммуногистохимического окрашивания биоптатов раневой поверхности в базальном слое эпидермиса выявляются единичные CD3+-клетки, в дерме и на участках воспалительного гнойного процесса сильная инфильтрация CD3+-клетками, при полуколичественном анализе — около 60% объема клеточного инфильтрата. В участках с менее выраженным воспалением количество CD3+-клеток меньше, но они образуют лимфоидные скопления вблизи сосудов. В этих скоплениях также обнаруживаются CD20+-клетки. В целом на препаратах выявляются множественные CD20+-клетки. Из полученных данных видно, что при использовании аутологичной плазмы клеточный состав CD3+ и CD 20+ схож со здоровой тканью, в то время как в контрольной группе животных отмечено резкое увеличение клеток обоих типов, что говорит о наличии ярко выраженного воспалительного процесса. При иммуногистохимическом исследовании биоптатов здоровой кожи не было выявлено наличие B-лимфоцитов и было отмечено наличие единичных Т-лимфоцитов (рис. 6.82, 6.83). На 11-е сутки лечения в биоптатах подопытной группы лошадей отсутствовали В-лимфоциты (рис. 6.84) и встречались единичные Т-лимфоциты (рис. 6.85), в то время как в биоптатах контрольной группы были выявлены множественные Ви Т-лимфоциты (рис. 6.86, 6.87). Полученные данные свидетельствуют, что Ви Т-клеточный состав раневой поверхности подопытной группы животных соответствует клеточному составу здоровой кожи, при этом реакция с В-лимфоцитами отсутствовала и встречались единичные Т-лимфоциты. В биоптатах раневой поверхности контрольной группы лошадей были выявлены избыточные скопления как В-, так и Т-лимфоцитов, что демонстрирует наличие выраженного воспалительного процесса. Следует отметить, что результаты иммуногистохимического исследования коррелируют с данными, полученными при клиническом наблюдении за раневым процессом, при котором было установлено, что аутологичная плазма способствует купированию отечности и гнойного экссудата в ранах у лошадей. Из проведенного исследования можно сделать вывод, что тромбо-

Рис. 6.82. Здоровая кожа. Иммуногистохими ческая реакция с СD20+-клетками (B-лимфо циты). Реакция отсутствует. Увеличение ×200

Рис. 6.83. Здоровая кожа. Иммуногистохими ческая реакция с СD3+-клетками (Т-лимфо циты). Присутствуют единичные клетки. Увеличение ×200 цитарная аутоплазма уменьшает выраженность воспалительной реакции, сокращает сроки заживления и может быть рекомендована как противовоспалительное средство при лечении ран у лошадей.

Рис. 6.87. Контрольная группа. Иммуногистохимическая реакция с клетками CD3+ (Т-лим фоциты). Выявлены множественные Т-лим фоциты. Увеличение ×200

Рис. 6.84. Подопытная группа. Иммуногистоимическая реакция с клетками СD20+ (В-лим фоциты). Реакция отсутствует. Увеличение ×200

Рис. 6.85. Подопытная группа. Иммуногистохимическая реакция с СD3+-клетками (Т-лим фоциты). Встречаются единичные клетки. Увеличение ×200

Рис. 6.86. Контрольная группа. Иммуногистохимическая реакция c CD20+-клетками (В-лим фоциты). Выявлены множественные В-лим фоциты, лимфоидные скопления

Справочная литература

1. Ахмеров Р.Р. Применение аутоплазмы, содержащей тромбоциты, в дерматокосметологии и стоматологии / Ахмеров Р.Р., Короткова О.И., Овечкина М.В., Зарудий Р.Ф., Воробьев А.А // Пластическая хирургия и косметология. 2013. № 1. C. 94–105.

2. Базарный В.В. Иммунная система кожи // Мезотерапия. 2011. Т. 2, № 14. Электронный ресурс: https://www.martinex.ru/publications/meso-journal/meso14/skin-immunesystem.html

3. Иммунологическая функция кожи в свете новых данных / О.В. Белова, И.В. Зимина, Т.И. Торховская,Н.А. Никитина,В.И. Сергиенко // Российский иммунологический журнал. 2014. Т. 8, № 2. С. 143–151.

4. Емелин А.Л., Ахтямов И.Ф. Клиническая эффективность тромбоцитарной аутоплазмы при лечении остеоартрозов // Вестник современной клинической медицины. 2013. Т. 6, № 1. С. 26–29.

5. Караулов А.В., Быков А.С., Быков С.А. Иммунология, микробиология и иммунопатология кожи // М.: Бином, 2012. 328 с.

6. Ковач М. Ортопедические заболевания лошадей: современные методы диагностики и лечения // М.: Королевский издательский дом, 2013. 610 с.

7. De Rossi R. Effects of platelet-rich plasma gel on skin healing in surgical wound in horses / De Rossi R. [et al.] //Acta Cir. Bras. 2009. Vol. 24, No. 4. P. 276–281.