Глава 4. Теоретическое обоснование метода Plasmolifting

Продолжаем публикацию книги Р. Р. Ахмерова с разрешения автора. Пятая часть посвящена теоретическому обоснованию метода Plasmolifting.

Источник: Ахмеров Р. Р. Регенеративная медицина на основе применения плазмы аутологичной крови. Технология Plasmolifting. 2-е изд., испр. и доп. М.: Литтерра, 2020. С. 47–55.

Итак, какие же размышления и выводы послужили основой для создания метода Plasmolifting и чем моя теория отличается от других? Вернемся на некоторое время к самому началу, то есть к вопросу о том, что такое плазма и каковы ее свойства. Плазма — жидкое межклеточное вещество крови. Она содержит ряд протеолитических систем, регулирующих гомеостаз и участвующих в развитии адаптивно-защитных реакций организма. Оптимизация и ускорение регенерации тканей являются одними из актуальных задач современной медицины. Данный постулат исходит из известного факта, что конечным этапом жизнедеятельности клетки является гипоксия. Соответственно, регенерация (возрождение) строится по принципу оксигенации клетки.

В 1980-х гг. при стимуляции процессов регенерации основное внимание уделяли роли оксигенации тканей. Безусловно, оксигенация тканей остается фундаментальным фактором, поскольку она улучшает фагоцитарную и бактерицидную способность иммунных клеток организма, а также поддерживает синтез коллагена и других белков.

В настоящее время основной целью исследований процессов регенерации является необходимость идентификации факторов роста, понимания механизма их действия и возможностей использования для улучшения заживления ран. Переходом от одной эры к другой послужило открытие того факта, что влияние на макрофаги кислорода в целом и напряжения кислорода в частности реализуется опосредованно, через факторы ангиогенеза и другие факторы роста, способствующие заживлению и противостоящие инфицированию.

Использование плазмы аутологичной крови представляет собой сегодня одну из немногих возможностей запускать и ускорять естественные механизмы регенерации за счет содержащихся в тромбоцитах факторов роста. Кроме того, она не токсична и не иммунореактивна. Получение аутологичной плазмы подразумевает отделение плазмы и тромбоцитов от эритроцитов как по градиенту плотности, так и с использованием специализированных лабораторных фильтров.

Аутологичная плазма модулирует и регулирует функцию первичных, вторичных и третичных факторов роста, влияя на все стадии регенерации одновременно. Упомянутое свойство отличает факторы роста аутологичной плазмы от рекомбинантных факторов роста, каждый из которых отвечает за отдельный механизм регенерации.

Факторы, содержащиеся в тромбоцитах, и их потенциал описаны в предыдущей главе. Они доставляются в ткани при введении в них аутологичной плазмы и концентрируются путем увеличения ее объема: увеличение объема плазмы в тканях повышает активность фибробластов (клеток соединительной ткани) и стимулирует их образование.

Фибробласты, в свою очередь, производят коллаген, гиалуроновую кислоту и эластин. Этот процесс приводит к образованию молодой соединительной ткани и росту капилляров.

Кроме того, факторы роста блокируют остеокласты и стимулируют пролиферацию остеобластов, что сдерживает дальнейшую убыль костной ткани и способствует ее регенерации. В итоге восстанавливаются обменные процессы, улучшаются микроциркуляция и метаболизм в клетках тканей, нормализуется тканевое дыхание и активизируется местный иммунитет.

Запуская все звенья естественных процессов регенерации одновременно и взаимодействуя с ними синергетически, аутологичная плазма представляет собой удобный и безопасный биологический «инструмент», ускоряющий регенеративные процессы.

Патофизиологический (ведь мы «имитируем» патологическое состояние) процесс действия аутологичной плазмы упрощенно можно представить следующим образом: вследствие утери контакта тромбоцита с эндотелием при выходе из кровеносного русла он изменяет свою форму, стимулируя выброс альфа-гранул, выделяющих в свою очередь факторы роста в рану.

Необходимо отметить, что большинство врачей и исследователей, говоря о плазме в контексте терапевтического применения, рассматривают ее как очередное официнальное средство. Я же склонен считать, что манипуляции с плазмой сродни трансплантации аутологичных тканей. Изначально было принято считать, что терапевтический эффект аутологичной плазмы объясняется в основном присутствием тромбоцитов и содержащимися в них факторами роста. Тем не менее очевидно, что эффективность плазмы крови обусловлена и другими ее составляющими, например микро- и макроэлементами и витаминами, находящимися в наиболее биодоступном для тканей состоянии. Поэтому не стоит отвергать и другие гипотезы механизмов действия плазмы (нутриентную, средовую и т.д.).

Тромбоциты — это элементы крови, наряду с лейкоцитами участвующие в процессах гемостаза и инициации регенерации. Кроме того, тромбоциты обладают антибактериальными, болеутоляющими и противо- и провоспалительными свойствами и являются участниками сложного процесса взаимодействия форменных элементов крови. Имеющиеся научные данные позволяют сделать вывод о том, что структура взаимодействия элементов крови в целом и плазмы в частности изучена лишь частично. Поэтому, по моему глубокому убеждению, нельзя пренебрегать ролью остальных составляющих плазмы (цитокины, факторы роста, макро- и микроэлементы, витамины, белки) в сложных процессах жизнедеятельности. Очевидно, что все процессы, происходящие в плазме и в сопряженных с ней тканях, мультиструктурны.

Об этом свидетельствуют многочисленные публикации о результатах клинических исследований, в ходе которых были сделаны выводы о том, что, например, значительную роль в обеспечении прямых функций тромбоцитов (включая образование тромбина, ретракцию сгустка и высвобождение факторов роста) в их концентратах играют нетромбоцитарные клеточные компоненты; что существует двунаправленная модуляция функций тромбоцитов эритроцитами и полиморфноядерными лейкоцитами, присутствующими в тромбе, при этом эритроциты могут модулировать эти функции посредством не только высвобождения химических факторов, но и физического взаимодействия; что ограничение излишней внутрисосудистой активации нейтрофилов является важным фактором предупреждения развития серьезных воспалительных патологических состояний, и эритроциты подавляют активацию и апоптоз нейтрофилов в цельной крови; что влияние лейкоцитов на клеточный провоспалительный ответ неоднозначно, а полностью отфильтровать их от тромбоцитов вообще невозможно. Приведенные примеры отражают результаты лишь некоторых исследований, общее же количество их настолько велико, что даже для краткого обзора всех этих публикаций потребовалось бы написать отдельную книгу. Вероятно, упомянутой мультиструктурностью и обусловлен тот факт, что результаты попыток выделить какие-либо звенья клеточных и других реакций спорны и не имеют подтверждения на практическом уровне. Весь спектр благоприятных и имеющих клиническую значимость свойств плазмы сохраняется при применении любых ее препаратов, полученных с помощью самых различных систем. В чем заключается терапия плазмой аутологичной крови? Терапия плазмой аутологичной крови предполагает введение нативной плазмы в ткани. Введение плазмы осуществляется, как правило, в инъекционной форме. Терапия проводится с целью достижения лечебного эффекта (инициация процессов регенерации, купирование спазма, обеспечение болеутоляющего, противо- и провоспалительного, а также антибактериального действия, выполнение функции протеза и т.д.). Кроме того, как было сказано выше, я считаю, что при введении плазмы мы стимулируем развитие естественных патофизиологических реакций, характерных для процесса образования синяка. Следовательно, посредством введения плазмы аутологичной крови мы имитируем механизм возникновения состояния стресса в тканях. В своей книге «Стресс жизни» Ганс Селье отмечал, что «стресс есть неспецифический ответ организма на любое предъявленное ему требование». Другими словами, кроме специфического эффекта, все воздействующие на нас агенты вызывают также и неспецифическую потребность осуществить приспособительные функции и тем самым восстановить нормальное состояние». Иначе говоря, стресс является необходимым условием для существования организма. Плазму получают посредством центрифугирования, в процессе которого компоненты крови разделяются по градиенту плотности. Суть первичного центрифугирования сводится к разделению эритроцитов и плазмы, содержащей тромбоциты, лейкоциты и факторы свертывания. Вторичное центрифугирование проводится редко. Поскольку в конце XX и начале XXI в., говоря о терапии аутологичной плазмой, подразумевали, как правило, терапию PRP, вспомним еще раз, что же это такое. В работах Р. Маркса, С. Хейнсворта и соавт. был сформулирован постулат о том, что только плазма с концентрацией тромбоцитов не менее 1 млн/мкл обеспечивает выраженную стимуляцию регенерации тканей и может называться терапевтической PRP. Поэтому в рамках данного метода центрифугирование плазмы осуществлялось до достижения в ней соответствующей концентрации тромбоцитов. Впоследствии в некоторых странах это определение легло в основу законодательных актов, регулирующих деятельность медицинских работников.

Изначально термин PRP применялся к аутологичному тромбоцитарному гелю, богатой факторами роста плазме или аутологичному тромбоцитарному концентрату, которые добавляли в трансплантат костной ткани или наносили слоем на уже установленный трансплантат, набрызгивали на поверхность мягких тканей или использовали в качестве биологической мембраны. Однако впоследствии значение этого термина распространилось и на инъекционную форму плазмы. Целесообразность упомянутой методики на сегодняшний день представляется сомнительной, с учетом того, что для получения препарата с концентрацией тромбоцитов, составляющей порядка 1 млн/мкл, необходимо забирать у пациента до 100 мл крови; методика двойного центрифугирования трудоемка и времязатратна; значительная потеря тромбоцитов происходит на лабораторном этапе; методика доступна лишь врачам хирургических специальностей, не говоря уже о том, что, как упоминалось выше, результаты последних исследований терапевтической эффективности плазмы с чрезмерно высокой концентрацией тромбоцитов неоднозначны и иногда кардинально противоположны.

В последние годы концепция концентрации тромбоцитов все чаще ставится под сомнение самыми различными авторами, и тому есть логическое обоснование: концентрация тромбоцитов зависит только от объема жидкой сыворотки, используемой для сохранения тромбоцитов во взвешенном состоянии. Количество сыворотки значительно варьирует в зависимости от протокола и предполагаемого метода применения, поэтому не влияет на степень выраженности терапевтического эффекта. И более логичной в данном случае выглядит концепция количества тромбоцитов (несмотря на то, что в большинстве публикаций четкое определение влияния этого параметра на клинические результаты отсутствует).

Говоря о точном клеточном составе в богатой лейкоцитами PRP и богатом лейкоцитами PRF, необходимо отметить, что большинство исследований, посвященных изучению факторов роста и концентраций тромбоцитов, показало относительный недостаток значимости этих параметров, обусловленный их высокой межиндивидуальной вариабельностью и кратковременностью действия: тромбоциты находятся в активированном и активном состоянии только в течение очень короткого времени, а факторы роста после их высвобождения либо «потребляются» организмом местно, либо растворяются в кровотоке за несколько минут или часов.

В препаратах крови содержатся клетки самых разных видов. Важным параметром является лейкоцитарная формула: популяции лимфоцитов очень разнообразны, и их воздействие отличается от воздействия моноцитов и гранулоцитов. Кроме того, в тромбоцитарном концентрате могут оказаться и многие другие клетки (например, циркулирующие в кровотоке стволовые клетки), и их тоже необходимо принимать во внимание.

Что же является принципиальным преимуществом метода Plasmolifting? Прежде всего, возможность увеличивать количество тромбоцитов в тканях путем увеличения объема вводимой плазмы. Данное свойство присуще только естественному, жидкому состоянию плазмы в соответствии с законом m = Vq, где m — масса абсолютного количества тромбоцитов; V — объем плазмы; q — концентрация тромбоцитов. На практике это означает введение не 0,2–0,3 мл, а 1–2 мл, что легко выполняется на мягких тканях и крупных суставах. Отмечу, что, несмотря на очевидность преимущества применения инъекционной формы и однократного центрифугирования, в литературе в течение долгого времени продолжалось муссирование вопроса о концентрации тромбоцитов. Причина, вероятно, заключается в привычности использования термина PRP, подразумевающего необходимость концентрации плазмы на лабораторном этапе. Тем же обстоятельством объясняется разобщенность мнений в отношении активации тромбоцитов, а также в отношении необходимости добавления кальция с целью активации тромбоцитов. Обсуждать влияние кальция уместно в том случае, когда речь идет о применении тромбоцитарного геля или концентратов, но не в случае, когда плазма вводится в инъекционной форме. Что мы подразумеваем под активацией тромбоцитов? Под активацией мы понимаем выброс комплекса активных биологических вещества (коагулянтов, факторов роста, бета-лизинов). Когда оно происходит и чем обусловлено? В физиологии и патофизиологии тромбоцитов данный этап описывается как нормальная реакция, обусловленная потерей контакта этих веществ с субэндотелиальными структурами. Стимулом активации может служить практически любое возмущение окружающей среды, вплоть до простого механического напряжения. Однако основными физиологическими активаторами тромбоцитов считаются коллаген (главный белок внеклеточного матрикса), тромбин (основной белок плазменной системы свертывания), аденозиндифосфат (появляющийся из разрушенных клеток сосуда или секретируемый самими тромбоцитами) и тромбоксан A2 (вторичный активатор, синтезируемый и выбрасываемый тромбоцитами; его дополнительная функция заключается в стимуляции вазоконстрикции). Активированные тромбоциты приобретают способность прикрепляться к месту повреждения (адгезия) и друг к другу (агрегация), формируя пробку, закупоривающую место повреждения. Кроме того, они участвуют в плазменном свертывании двумя основными способами — экспонированием прокоагулянтной мембраны и секрецией α-гранул. Какова роль кальция в плазме? Безусловно, кальций является одним из основных факторов инициации реакций, связанных с активацией тромбоцитов. А цитрат, применяемый в качестве антикоагулянта, связывает молекулы кальция хелатным соединением. При этом связывается лишь часть кальция, которой, впрочем, достаточно для активации тромбоцитов. Более того, внутри самого тромбоцита присутствуют две независимые системы снабжением кальцием. Откуда же возникло заблуждение о необходимости добавления кальция? Причиной тому, вероятно, является ориентированность на первую методику получения PRP, в рамках которой кальций и тромбин добавлялись с целью формирования гелевого сгустка из концентрированной плазмы. Идея использовать инъекционную форму вместо геля пришла мне и моим коллегам в 2003 г. В публикациях, появившихся в информационном пространстве в 2005 г., я уже упоминал о преимуществах инъекционной формы и вероятности ее терапевтического превосходства над концентратами. Методы и результаты применения упомянутой формы плазмы описаны в работе «Применение обогащенной тромбоцитами аутоплазмы для лечения фотодерматоза». По сути, метод Plasmolifting объединяет в себе эффективность сложной и многоэтапной методики PRP, и простоту и доступность аутогемотерапии. Его преимущества — возможность применения в нехирургической практике (применение геля возможно только в хирургии и стоматологии, поскольку для его введения требуется выполнение разреза); возможность применения в хирургии до операции, в ходе операции, после операции и иногда вместо операции; возможность увеличивать концентрацию тромбоцитов in vivo; отсутствие необходимости двойного центрифугирования; возможность использовать плазму в форме капель (лечение конъюнктивитов), аппликаций (пилинги, лазерное омоложение, лечение ожогов и язв), ванночек (лечение гинекологических заболеваний) и замораживаемых суппозиториев (лечение анальных трещин). Кроме того, появилась возможность нагревать плазму и получать плазмогель, используемый для контурной пластики. А разработанный мной плазмопорошок (2017 г.) активно применяется для лечения целого ряда заболеваний дыхательных путей и в стоматологии. Более подробно на этом мы остановимся в следующем разделе.

Как вводится аутологичная плазма? Сегодня существует целый ряд способов введения плазмы. Инъекционный метод применяется чаще других, однако все остальные методы (аппликационный, инфузионный, ингаляционный, суппозитории, пероральный) также прекрасно себя зарекомендовали и применяются там, где инъекционное введение плазмы неудобно или менее эффективно.

На сегодняшний день в рамках нашего метода мы используем два основных принципа.

●

●Первый принцип основан на том, что область наивысшей концентрации факторов роста находится в месте введения плазмы. То есть в месте проникновения иглы возникает контакт специфического фактора роста с соответствующим ему тканевым акцептором.

●

●Второй принцип можно назвать принципом «терапевтического мешка». Суть данного принципа — «окутывание» органа или ткани, подлежащих терапии.

Существуют различные схемы введения плазмы. Для получения желаемого эффекта может потребоваться проведение как одной, так и 4–5 процедур. Иногда мы видим результат уже через 1–2 дня, а иногда — через 3–4 мес. В чем же дело?

С моей точки зрения, разгадка заключается в степени биологического ответа тканей. Скажем, ответные реакции со стороны слизистой оболочки протекают быстро, со стороны кожи — зачастую медленно. Тем не менее, каким бы ни был вид патологии, ответ тканей наблюдается уже через 1–2 дня, а эффект может длиться более года. Исключение составляют только кожа и ее придатки. Сама функция кожи не предполагает быстрого ответа тканей, что мы и наблюдаем при применении плазмы в косметологии. Врач, уверенный в успехе терапии аутологичной плазмой, должен проинформировать пациента о том, что эффект регенерации после введения инъекций плазмы будет нарастать медленно и постепенно.

В сложных и запущенных случаях, когда для получения результата требуются время и терпение, или же при развитии обострения, общая продолжительность курса лечения определяется по принципу quantum satis, а рекомендуемый интервал между процедурами составляет две недели.

Насколько эффективен метод Plasmolifting? Клинические случаи и соответствующие им фотографии, представленные в разделе II, расскажут о нем более чем красноречиво.

Справочная литература

1. O’Neil D. Blood Components. 1999. Palomar College. Archived from the original on June 5, 2013.

2. van Hinsbergh V. Vascular Control of Hemostasis. CRC Press, 1996. P. 169.

3. Ахмеров Р.Р., Зарудий Р.Ф., Бочкова (Короткова) О.И., Рычкова И.Н. Аутостимуляция дермы при повышенном выпадении волос и алопеции // Экспериментальная и клиническая дерматокосметология. 2011. № 4. С. 36–40.

4. Ахмеров Р.Р., Зарудий Р.Ф., Бочкова (Короткова) О.И., Рычкова Н.Н. Плазмолифтинг («PlasmoliftingТМ») — лечение возрастной атрофии кожи богатой тромбоцитами аутоплазмой // Эстетическая медицина. 2011. Т Х, № 2. С. 181–187.

5. Anita E. Plasma rich in growth factors: Preliminary results of use in the preparation of future sites for implants // Int. J. Oral Maxillofac. Implants. 1999. No. 14. Р. 529–535.

6. Davis J.C., Buckley C.J., Per-Olof B. Compromised soft tissue wounds: Correction of wound hypoxia // T.K. Hunt (ed.). Problem Wounds: The Role of Oxygen. New York: Elsevier, 1988. Р. 143–152.

7. Greenlagh D.G. The role of growth factors in wound healing // J. Trauma. 1996. No. 41. Р. 159–167.

8. Fennis J.P.M., Stoelinga P.J.W., Merkx M.A.W., Jansen J. A Reconstruction of the mandible with a poly(D,L-lactide) scaffold, autogenouscorticocancellous bone graft, and autogenous platelet-rich plasma: an animal experiment // Tissue engineering. 2005. Vol. 11, No. 7–8. Р. 1045–53.

9. Froum S.J., Wallace S.S., Tarnow D.P., Cho S.C. Effects of platelet-reach plasma on bone growth and osseintegration in human maxillary sinus grafts: Three bilateral case reports // Int. J. Periodontics Restorative Dent. 2002. No. 22. Р. 45–53.

10. Johnson K., Hunt T.K., Mathes S.J. Oxygen as an isolated variable influences resistance to infection // Ann. Surg. 1988. No. 208. Р. 783–787.

11. Haynesworth S.E., GoshimaО., Goldberg V.M., Caplan A.I. Characterization of cells with osteogenic potential from human marrow // Bone. 1992. Vol. 13, No. 1. Р. 81–88.

12. Hooton T.M., Stamm W.E. Diagnosis and treatment of uncomplicated urinary tract infection // Infect. Dis. Clin. North A.M. 1977. Vol. 11, No. 3. P. 551–581.

13. Hussain M.Z., LaVan F., Hunt T.K. Wound micro-environment // I.K. Cohen, R. Diegelman (eds.). Wound Healing: Biochemical and Clinical Aspects. Philadelphia: Saunders,

1991. Р. 162–196.

14. Knighton D., Silver I., Hunt T.K. Regulation of wound healing angiogenesis — Effect of oxygen gradients and inspired oxygen concentration // Surgery. 1981. No. 90. Р. 262–270.

15. Marx R.E. DDS. Platelet-reach plasma (PRP): what is PRP and what is not PRP? // Implantdentistry. 2001. Vol. 10, No. 4. Р. 225–228.

16. Wharfedale J.E., Mohan S., Lundy M., Baylink D.J. Skeletal growth factor and other factors known to be present in bone matrix stimulate proliferation and protein synthesis in human bone cells // J. Bone Miner. Res. 1990. No. 5. P. 179–186.

17. Laki K. Our ancient heritage in blood clotting and some of its consequences // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1972, Dec 8.

18. Parrish, William & Roides, Breana & Hwang, Julia & Mafilios, Michael & Story, Brooks & Bhattacharyya, Samir. (2016). Normal platelet function in platelet concentrates requires non-platelet cells: a comparative in vitro evaluation of leucocyte-rich (type 1a) and leucocyte-poor (type 3b) platelet concentrates. BMJ Open Sport & Exercise Medicine. 2. e000071. 10.1136/bmjsem-2015-000071.

19. Marcus A.J., Safier L.B., Broekman M.J., Islam N., Fliessbach J.H., Hajjar K.A., Kaminski W.E., Jendraschak E., Silverstein R.L., von Schacky C. Thrombosis and inflammation as multicellular processes: significance of cell-cell interactions // Thromb Haemost.1995. No.

74. P. 213–217.

20. Turitto V.T., Weiss H.J. Platelet and red cell involvement in mural thrombogenesis // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1983. No. 416. P. 363–376.

21. Turitto V.T., Weiss H.J. Red blood cells: their dual role in thrombus formation // Science.1980. No. 207. P. 541–543.

22. Lizcano, Anel & Secundino, Ismael & Döhrmann, Simon & Corriden, Ross & Rohena, Cristina & Diaz, Sandra & Ghosh, Pradipta & Deng, Lingquan & Nizet, Victor & Varki, Ajit. (2017). Erythrocyte sialoglycoproteins engage Siglec-9 on neutrophils to suppress activation. Blood. 129. blood-2016. 10.1182/blood-2016-11-751636.

23. Mariani E., Canella V., Cattini L. et al. Leukocyte-Rich Platelet-Rich Plasma Injections Do Not Up-Modulate Intra-Articular Pro-Inflammatory Cytokines in the Osteoarthritic Knee // PLoS ONE. 2016. Vol. 11, No. 6. P. e0156137. DOI: https: //doi.org/10.1371/journal. pone.0156137.

24. Javadpour F., Jeje A. (2012). Modeling Filtration of Platelet-Rich Plasma in Fibrous Filters. Transport in Porous Media. Vol. 91. P. 677–696. 10.1007/s11242-011-9866-y.

25. Yang L.C., Hu S.W., Yan M., Yang J.J., Tsou S.H., Lin Y.Y.. Antimicrobial activity of plasma-rich plasma and other plasma preparations against periodontal pathogens // J. Periodontol. 2015. No. 86. P. 310–318.

26. Drago L., Bortolin M., Vassena C., Taschieri S., Del Fabbro M. Antimicrobial activity of pure platelet-rich plasma against microorganisms isolated from oral cavity // BMC Microbiol. 2013. No. 13. P. 47.

27. Drago L., Bortolin M., Vassena C., Romanò CL., Taschieri S., Fabbro M.D. Plasma Components and Platelet Activation Are Essential for the Antimicrobial Properties of Autologous Platelet-Rich Plasma: An In Vitro Study // PLoS ONE. 2014. Vol. 9, No. 9. P. e107813.

28. El-Sharkawy H., Kantarci A., Deady J., Hasturk H., Liu H., Alshahat M. and Van Dyke T.E. Platelet-Rich Plasma: Growth Factors and Pro- and Anti-Inflammatory Properties // J. Periodontol. 2007. No. 78. P. 661–669. DOI: 10.1902/jop.2007.060302.

29. El-Sharkawy H., Kantarci A., Deady J., Hasturk H., Liu H., Alshahat M., van Dyke T.E. Platelet-Rich Plasma: Growth Factors and Pro- and Anti-Inflammatory Properties // Journal of Periodontology. 2007. No. 78. P. 661–669. DOI: 10.1902/jop.2007.060302.

30. Asfaha S., Cenac N., Houle S. et al. Protease-activated receptor-4: a novel mechanism of inflammatory pain modulation. British journal of pharmacology. 2007. No. 150(2), P. 176–

185. doi: 10.1038/sj.bjp.0706975.

31. Paola Romina Amable, Rosana Bizon Vieira Carias, Marcus Vinicius Telles Teixeira, Ítalo da Cruz Pacheco, Ronaldo José Farias Corrêa do Amaral, José Mauro Granjeiro, Radovan Borojevic. Platelet-rich plasma preparation for regenerative medicine: optimization and quantification of cytokines and growth factors // Stem Cell Research & Therapy. 2013. Vol. 4, No. 3. P. 1.

32. Lubkowska A., Dolegowska B., Banfi, G.. Growth Factor Content in PRP and their applicability in medicine // Journal of biological regulators and homeostatic agents. 2012. No.

26. P. 3–22.

33. Himani Pathak, Sujata Mohanty, Aadithya B. Urs, Jitender Dabas. Treatment of Oral Mucosal Lesions by Scalpel Excision and Platelet-Rich Fibrin Membrane Grafting: A Review of 26 Sites // Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. Vol. 73, Iss. 9. P. 1865–1874.

34. Davoud Kazemi, Ashraf Fakhrjou, Vahid Mirzazadeh Dizaji, and Majid Khanzadeh Alishahi. Effect of Autologous Platelet Rich Fibrin on the Healing of Experimental Articular Cartilage Defects of the Knee in an Animal Model // BioMed Research International.

2014. Vol. 2014. Article ID 486436. DOI: https: //doi.org/10.1155/2014/486436.

35. Knapen M., Gheldof D., Drion P., Layrolle P., Rompen E., Lambert F. Effect of L-PRF in Bone Regeneration. Clinical Implant Dentistry and Related Research. 2015. No. 17. P. e143-e152. DOI: 10.1111/cid.12146.

36. Cieslik-Bielecka A., Dohan Ehrenfest D.M., Lubkowska A., Bielecki T. Microbicidal properties of Leukocyte- and Platelet-Rich Plasma/Fibrin (L-PRP/L-PRF): new perspectives // J. Biol. Regul. Homeost. Agents. 2012. No. 26. P. 43S–52S.

37. Giannini S., Cielo A., Bonanome L., Rastelli C., Derla C., Corpaci F., Falisi G.. Comparison between PRP, PRGF and PRF: lights and shadows in three similar but different protocols // Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci. 2015. Vol. 19, No. 6. P. 927–930.

38. Gosens T., Den Oudsten B.L., Fievez E. et al. // International Orthopaedics (SICOT).

2012. No. 36. P. 1941. DOI: https: //doi.org/10.1007/s00264-012-1540-7.

39. Richardson At. The analysis of muscle action potentials in the differential diagnosis of neuromuscular diseases // Arch. Phys. Med. Rehabil. 1951. Vol. 32, No. 4. P. 199–206.

40. «Contusion» at Dorland’s Medical Dictionary.

41. Harrison’s Principles of Internal Medicine. 17th ed. McGraw-Hill Professional, 2008.

42. Ulrich-Lai Y.M.; Herman J.P. Neural Regulation of Endocrine and Autonomic Stress Responses // Nature Reviews Neuroscience. 2017. Vol. 10. No. 6. P. 397–409.

43. A Personal Message from Hans Selye // Journal of Extension. 1980. Vol. 18, No. 3.

44. Shakman S. H. Autohemotherapy Reference Manual // CreateSpace Independent Publishing Platform. 1998, Feb. 1.

45. Marx R.E. Platelet-rich plasma (PRP): What is PRP and what is not PRP? // Implant Dent.

2001. No. 10. p. 225–228. DOI: 10.1097/00008505-200110000-00002.

46. Haynesworth S.E., Kadiyala S., Liang L.N. et al. Mitogenic stimulation of human mesenchymal stem cells by platelet release suggest a mechanism for enhancement of bone repair by platelet concentrates. Presented at the 48th Annual Meeting of the Orthopedic Research Society, Dallas, TX, February 2002.

47. Lodish H., Berk A., Zipursky S.L. et al. Molecular Cell Biology. 4th ed. New York : W.H. Freeman, 2000. Section 22.3, Collagen: The Fibrous Proteins of the Matrix.

48. GRCh38: Ensembl release 89: ENSG00000180210. Ensembl, May 2017.

49. Thon J.N., Italiano J.E. Platelet Formation // Seminars in Hematology. 2010. Vol. 47, Iss. 3. P. 220–226.

50. Ахмеров Р.Р., Зарудий Р.Ф. Применение обогащенной аутоплазмы для лечения фотодерматоза: реферат. Уфа: ФГУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии», 2003.

51. Dohan Ehrenfest D.M., Andia I., Zumstein M.A., Zhang C.Q., Pinto N.R., Bielecki T. Classification of platelet concentrates (Platelet-Rich Plasma-PRP, Platelet-Rich Fibrin- PRF) for topical and infiltrative use in orthopedic and sports medicine: current consensus, clinical implications and perspectives // Muscles Ligaments Tendons J. 2014. Vol. 4, No. 1. P. 3–9. Published 2014, May 8.

52. Weibrich G., Hansen T., Kleis W., Buch R., Hitzler W.E. Effect of platelet concentration in platelet-rich plasma on peri-implant bone regeneration // Bone. 2004. Vol. 34, No. 4. P. 665–671.

53. Bielecki T., Dohan Ehrenfest D.M., Everts P.A., Wiczkowski A. The role of leukocytes from L-PRP/L-PRF in wound healing and immune defense: new perspectives // Curr. Pharm. Biotechnol. 2012. Vol. 13, No. 7. P. 1153–1162.

54. Weibrich G., Kleis W.K., Kunz-Kostomanolakis M., Loos A.H., Wagner W. Correlation of platelet concentration in platelet-rich plasma to the extraction method, age, sex, and platelet count of the donor // Int. J. Oral Maxillofac. Implants. 2001. Vol. 16, No. 5. P. 693–699.